Кал на гельминты методом обогащения? особенности диагностики

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Копрологические исследования (исследования кала) в диагностике гельминтозов имеют большое значение, так как многие гельминты паразитируют в кишечнике или органах с ним связанных, а яйца их выделяются с испражнениями.

Испражнения исследуются двумя методами:

1. Макроскопический – обнаруживают гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы. Небольшие порции кала, перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Все подозрительные образования пинцетом переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина.

При методе отстаивания исследуемую порцию фекалий размешивают с водой в стеклянном цилиндре, после отстаивания сливают верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной ее сливают, а осадок просматривают в чашке Петри.

2. Микроскопический – для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Существует много методов исследования.

1). Нативный мазок – наиболее распространенный и технически доступный метод исследования. Можно обнаружить яйца и личинки всех гельминтов. Однако, при небольшом количестве яиц их не всегда удается найти. Поэтому используется метод обогащения.

1). Метод Фюллеборга – это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 – плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40% раствор NaCl). Метод более эффективен, чем нативный мазок. В стеклянные банки помещают 2-5 г фекалий и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом. Недостаток метода – замедленное высплывание яиц различных гельминтов, карликовый цепень – через15-20 минут, аскарид – 1,5 часа, власоглав – 2-3 часа.

2) Метод Калантарян – также метод обогащения, но применяется насыщенный раствор NaNO₃ (1,38 плотность). Большинство яиц всплывает, не требуется исследования осадка. Недостаток – длительное выдерживание яиц в растворе, приводит к тому, что некоторые яйца начинают набухать и оседать на дно, исчезая с поверхностной пленки.

3. Метод Горячева – основан на принципе осаждения яиц, обнаружения мелких яиц трематод. В качестве раствора используют насыщенный раствор NaCl и сверху осторожно наслаивают 3-4 мл раствора фекалий. Через 15-20 часов яйца трематод оседают на дно. Жидкость сливают, осадок на предметное стекло и под микроскоп.

4. Метод закручивания по Шульману – для обнаружения в кале личинок гельминтов. Исследуют только свежевыделенные фекалии. 2-3 г помещают в стеклянную банку и приливают 5-кратное количество воды, быстро размешивают палочкой, не касаясь стенок банки – 20-30 минут, затем палочку быстро вынимают, и каплю жидкости на конце переносят на предметное стекло и микроскопируют.

5. Метод Бермана – основан на способности, личинок гельминтов мигрировать, по направлению к теплу, и служит для выявления их в фекалиях.

6. Метод Харада и Мори (метод выращивания личинок) и рекомендуется для исследования на анкилостомитозы. Метод основан на том, что в тепле и на влажной фильтрованной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить. На середину полоски фильтрованной бумаги наносят 15 г кала, бумагу с фекалиями помещают в банку, так, чтобы нижний конец был погружен в воду, а верхний закреплен пробкой. Банку выдерживают в термостате 28 0 С в течение 5-6 дней. Филяриевидные личинки развиваются за это время и спускаются в воду. Жидкость исследуют под лупой. Если трудно обнаружить, жидкость центрифугируют, убив предварительно личинок нагреванием до 60 0 . Лаборант должен работать в перчатках.

7. Методы на энтеробиоз – выявление яиц острицы и бычьего цепня.

а) соскоб с перианальных складок – ватным тампоном, туго намотанным на деревянную палочку и смоченную 50% раствором глицерина. В лаборатории тампон смывают 1-2 каплями 50% водным раствором глицерина.

б) метод липкой лепты (метод Грэхэма)

Липкую ленту прикладывают к перианальным складкам, затем липким слоем к предметному стеклу и микроскопируют.

В) соскоб с помощью глазных палочек (метод Рабиновича). Для перианального соскоба используют стеклянные глазные палочки, широкая часть которых покрывается специальным клеем, что позволяет удерживать яйца остриц.

Исследование крови, желчи, мокроты и мышц

Микроскопия крови – обнаруживают личинки филярий.

Исследование дуоденального содержимого и желчи. Яйца и личинки гельминтов паразитирующих в печени, желчном пузыре, поджелудочной железе (описторхоз, фасциолез, дикроцелилз) и двенадцатиперстной кишке (стронгилоидоз).

Исследование мокроты – яйца параганима, личинки аскариды, некатора, стронгилоида, элементы эхинококкового пузыря.

Исследование мышц – при подозрении на трихинеллез исследуют мышцы больного или трупа, а также мясо, предположительно послужившего причиной заражения человека. С целью трихинеллоскопии мышцу разрезают на мелкие кусочки и помещают в компрессорий, это два широких, толстых стекла, которые раздавливают мышцы и личинки трихинеллы обнаруживаются в виде капсул – метод компрессии.

Метод переваривания – мышцы заливают искусственным желудочным соком (раствор соляной кислоты и пепсин). Мышцы перевариваются, а личинки легко выявляются. Определение интенсивности инвазии: количество личинок до 200 на 1 г мышечной ткани – умеренная интенсивность инвазии; до 500 – интенсивная; свыше 500 – сверхинтенсивная инвазия.

Серологические методы исследования (выявление антител в сыворотке крови) используются для диагностики трихинеллеза, эхинококкоза, альвеококкоза, цистицеркоза и ряда других гельминтов. Эти методы особо ценны, когда наличие паразита в организме другими более доступными путями доказать не удается. Следует учитывать, что серологические реакции не являются абсолютным показателем наличия или отсутствия паразита, что обусловлено и состоянием иммунитета и спецификой той или иной реакции.

Сбор должен осуществляться перед началом лечения либо через 1-3 недели после его окончания.

Правила взятия биоматериала: Кал после естественной дефекации собирается в контейнер с ложечкой и завинчивающейся крышкой в количестве 1/3 объема контейнера из 3-5 различных мест. Избегать контакта биоматериала с поверхностью унитаза. Доставляют в лабораторию в первичном контейнере. Крышку контейнера плотно закрутить.

Доставка в лабораторию в день сбора.

Метод исследования: модифицированный метод седиментации с использованием концентраторов PARASEP.

Гельминты широко распространены на всех континентах. По оценкам Всемирной организации здравоохранения более 2 млрд. человек в мире заражены гельминтозами, статистика включает в себя не только население развивающихся стран, но и благополучные страны Европы. Ежегодно в Российской Федерации выявляется до 30 тысяч случаев гельминтозов. В 2015 году в Российской Федерации зарегистрировано 26828 случаев гельминтозов (24,2 на 100 тысяч населения) (Письмо от 3 октября 2016 года N 01/13265-16-27). Бесспорными лидерами среди заболеваний являются аскаридоз, энтеробиоз, трематодозы, трихоцефалез и гименолепидоз.

В настоящее время известно около 250 видов гельминтов, паразитирующих у человека; на территории России встречаются более 60 видов. Показатели заболеваемости населения зависят от многих факторов: особенностей жизненного цикла паразита, географических и климатических условий, уровня социально-экономического развития стран, национальных традиций населения, доступности и уровня медицинского обслуживания.

В клинике гельминтозов выделяют две основные фазы – острую и хроническую. В острой фазе (первые недели после заражения) преобладают патологические изменения, обусловленные общей аллергической реакцией на антигены паразита. Основными клиническими проявлениями этой стадии являются повышение температуры, увеличение лимфатических узлов, кожный зуд, аллергические высыпания на коже, боли в мышцах и суставах. Продолжительность хронической стадии определяется временем жизни паразита и может достигать нескольких лет.

Клинические проявления в значительной степени определяются локализацией паразита, его численностью и особенностями питания. Основными механизмами патогенного действия паразитов в хроническую стадию являются:

1. Механическое воздействие на ткани и органы хозяина в результате их разрушения органами фиксации паразита (присосками, крючьями), при тесном соприкосновении с режущими пластинами и кутикулярными шипиками покрывающими тело гельминта или механическом сдавлении органов при увеличении размеров гельминта.
2. Нарушение обмена веществ в организме хозяина, что связано с активным поглощением паразитом биологически ценных веществ – белков, жиров, витаминов, минеральных веществ, микро — и макроэлементов.
3. Токсическое влияние продуктов жизнедеятельности паразита приводит к нарушению функций печени, почек, головного мозга, а также к угнетению иммунной системы хозяина.
4. Воздействие антиферментов гельминта. Черви выделяют в полость кишечника вещества, которые нейтрализуют активность пищеварительных ферментов хозяина, что, в свою очередь, приводит к нарушению функций желудочно-кишечного тракта.
5. Нервно-рефлекторное влияние. Паразитирование гельминтов в просвете кишечника вызывает раздражение рецепторов, что рефлекторно приводит к нарушению перистальтики кишечника и возникновению спазмов.
6. Стимуляция новообразований. Разрушение тканей хозяина и воздействие на клетки токсических продуктов жизнедеятельности гельминта могут провоцировать образование опухолей в местах локализации паразита.

Для диагностики протозойных болезней и глистных инвазий применяются следующие лабораторные методы:

• Макроскопическое описание;
• Копроовоскопия (микроскопия нативного мазка кала, методы обогащения (седиментация, флотация);
• Иммунологические методы.

В копроовоскопическом исследовании используются концентраторы PARASEP.

Концентраторы PARASEP – модифицированный метод седиментации или концентрирования осадка, который считают золотым стандартом в диагностике кишечных паразитов. Благодаря этому достигается высокая выявляемость всех видов кишечных паразитов (метод рекомендован ВОЗ и российскими МУК 4.2.3145-13 2014 г.).

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

• Диагностика паразитарных заболеваний;
• Оценка эффективности проводимой терапии паразитарных заболеваний.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр Референсные значения Анализ кала на яйца гельминтов и цисты простейших с использованием концентратора Parasep. Не обнаружено

В случае выявления в результате будут указаны род, и вид паразита которому принадлежат яйца или цисты.

Правила взятия биоматериала: Кал после естественной дефекации собирается в контейнер с ложечкой и завинчивающейся крышкой в количестве 1/3 объема контейнера из 3-5 различных мест. Избегать контакта биоматериала с поверхностью унитаза. Доставляют в лабораторию в первичном контейнере. Крышку контейнера плотно закрутить.

Доставка в лабораторию в день сбора.

Метод исследования: модифицированный метод седиментации с использованием концентраторов PARASEP.

Гельминты широко распространены на всех континентах. По оценкам Всемирной организации здравоохранения более 2 млрд. человек в мире заражены гельминтозами, статистика включает в себя не только население развивающихся стран, но и благополучные страны Европы. Ежегодно в Российской Федерации выявляется до 30 тысяч случаев гельминтозов. В 2015 году в Российской Федерации зарегистрировано 26828 случаев гельминтозов (24,2 на 100 тысяч населения) (Письмо от 3 октября 2016 года N 01/13265-16-27). Бесспорными лидерами среди заболеваний являются аскаридоз, энтеробиоз, трематодозы, трихоцефалез и гименолепидоз.

В настоящее время известно около 250 видов гельминтов, паразитирующих у человека; на территории России встречаются более 60 видов. Показатели заболеваемости населения зависят от многих факторов: особенностей жизненного цикла паразита, географических и климатических условий, уровня социально-экономического развития стран, национальных традиций населения, доступности и уровня медицинского обслуживания.

В клинике гельминтозов выделяют две основные фазы – острую и хроническую. В острой фазе (первые недели после заражения) преобладают патологические изменения, обусловленные общей аллергической реакцией на антигены паразита. Основными клиническими проявлениями этой стадии являются повышение температуры, увеличение лимфатических узлов, кожный зуд, аллергические высыпания на коже, боли в мышцах и суставах. Продолжительность хронической стадии определяется временем жизни паразита и может достигать нескольких лет.

Клинические проявления в значительной степени определяются локализацией паразита, его численностью и особенностями питания. Основными механизмами патогенного действия паразитов в хроническую стадию являются:

1. Механическое воздействие на ткани и органы хозяина в результате их разрушения органами фиксации паразита (присосками, крючьями), при тесном соприкосновении с режущими пластинами и кутикулярными шипиками покрывающими тело гельминта или механическом сдавлении органов при увеличении размеров гельминта.
2. Нарушение обмена веществ в организме хозяина, что связано с активным поглощением паразитом биологически ценных веществ – белков, жиров, витаминов, минеральных веществ, микро — и макроэлементов.
3. Токсическое влияние продуктов жизнедеятельности паразита приводит к нарушению функций печени, почек, головного мозга, а также к угнетению иммунной системы хозяина.
4. Воздействие антиферментов гельминта. Черви выделяют в полость кишечника вещества, которые нейтрализуют активность пищеварительных ферментов хозяина, что, в свою очередь, приводит к нарушению функций желудочно-кишечного тракта.
5. Нервно-рефлекторное влияние. Паразитирование гельминтов в просвете кишечника вызывает раздражение рецепторов, что рефлекторно приводит к нарушению перистальтики кишечника и возникновению спазмов.
6. Стимуляция новообразований. Разрушение тканей хозяина и воздействие на клетки токсических продуктов жизнедеятельности гельминта могут провоцировать образование опухолей в местах локализации паразита.

Что такое анализ кала методом обогащения?

Это один из методов микроскопического исследования кала, основанный на предварительной обработке полученного кала во флотационном растворе и с последующим обнаружением в нем яиц гельминтов или их частей, а также форм простейших (ооцисты, цисты лямблий и др.)

Метод флотации (обогащения) основан на том, что плотность раствора выше плотности яиц гельминтов и форм простейших. Благодаря этому формы жизни паразитов перемещаются на поверхность раствора в соответствии с разницей плотностей. Образовавшаяся пленка снимается и исследуется под микроскопом.

Цель метода

Используется как для первоначального выявления гельминтов, так и для контроля лечения.

Как подготовится к исследованию?

• Иметь на руках направление от врача. В нем проверить свои инициалы, адрес.
• Приобрести самостоятельно одноразовый стерильный контейнер для сбора кала, который продается в аптеке. Возможно также использование пустого спичечного коробка или небольшой стеклянной банки с завинчивающейся крышкой и широким горлом. Банка должная быть вымыта и простерилизована.
• Разборчиво написать на емкости свою фамилию, инициалы, дату и время забора.
• Обязательно перед сбором кала выполнить мероприятия личной гигиены!
• За 2 дня до сдачи не проводить: клизмы, рентгенологические исследования кишечника с использованием контраста (ирригоскопию), эндоскопические методы исследования — фиброколоноскопию. Если такие исследования имели место – предупредить врача, назначавшего исследование.
• Не проводить сбор кала во время менструации.
• Исключить прием таких медикаментов, как: слабительные, активированный уголь, энтеросгель, препараты железа, ректальные свечи, лекарственные средства содержащие висмут либо медь, препараты белладонны, пилокарпин.
• Если врач подозревает наличие описторхоза: исключить из рациона рыбу, грибы. По рекомендациям врача, в данном случае, возможно использование желчегонных трав либо препарата Фламин.
• Соблюдать диету для устранения метеоризма, как правило, не менее 2-х дней до исследования. Исключаются следующие продукты: капуста, бобовые, сладкое, фрукты, газировка, молочнокислая продукция.
• Не употреблять за 2 дня до анализа продукты меняющие цвет кала, а именно: свёклу, чернику, вишню, черную смородину, спаржу, листья салата.

Методика сбора кала для анализа

1. Забор производится в утреннее время.
2. Если по каким-либо причинам забор невозможен, то можно сделать это заранее. Но временной промежуток от момента выполнения процедуры до доставки в лабораторию не должен превышать 6-8 часов. Температура хранения 4-8 ° C .
3. До акта дефекации помочится, выполнить гигиенические мероприятия. В пробу не должны попасть моча либо вода.
4. Акт дефекации должен быть естественным, без использования слабительного.
5. Испражнения желательно сразу собрать в подготовленную емкость. Если есть возможность, то используют судно либо его имитацию (полиэтиленовая пленка, пакет).
6. Если фекалии оформлены, то производится взятие кусочков из разных участков для более информативного результата. Как правило, используется пластмассовая ложка или шпатель.
7. Жидкие фекалии должны занимать не менее 1/3 контейнера или банки.
8. Плотно закрыть емкость.
9. Проверить написанные инициалы, фамилию. Обязательно указать дату и время забора!
10. Доставить в лабораторию как можно быстрее. Крайний срок – 8 часов.

Расшифровка результатов

Возможно два пути развития событий на этом этапе: положительный и отрицательный результаты.

• Отрицательный результат на наличие яиц гельминтов/простейших – глистной инвазии либо инфицирования простейшими нет. Как правило, такой результат у здоровых людей. Если же присутствует симптоматика глистной инвазии – зуд ануса, бессонница, нервозность, похудение на фоне повышенного аппетита, тошнота, кожная сыпь при отсутствии других причин, признаки недостатка витаминов (сухость кожи, выпадение волос и др.), хроническая анемия (гемоглобин 12 ) – анализ повторяют! Также производится исключение другой патологии организма.
• Положительный результат: т.е. яйца паразитов либо формы простейших найдены. Вне зависимости от наличия либо отсутствия симптоматики, необходимо обратиться с результатом к врачу-инфекционисту/врачу – паразитологу. Производится подбор профилактических, а при необходимости и лечебных доз антигельминтных препаратов. Может назначаться симптоматическое лечение, к примеру, направленное на устранение признаков недостатка витаминов.

После проведенных лечебных мероприятий анализ кала повторяют для контроля эффективности лечения.

Таким образом, метод анализа кала методом обогащения позволяет достоверно выявить не только гельминтов, но и простейших. Последнее особенно актуально в свете того, что простейшие завозятся туристами после посещения стран с плохой очистительной системой воды. Как правило, это страны Юго-Восточной Азии, Латинской Америки, Индия, Египет и многие другие.